Hidlo Uwch Ffibr Hollow 300kd: Dadansoddiad o Broses Crynodiad A Phuro Effeithiolrwydd Uchel ar gyfer Traed-a-Firws A/G Clefyd y Genau

Rhagymadrodd

Mae clwy'r traed a'r geg (FMD) yn glefyd acíwt, twymyn, a hynod heintus a achosir gan firws clwy'r traed a'r genau (FMDV). Mae'r firws hwn yn effeithio ar anifeiliaid carnau, gyda dros 70 o rywogaethau sy'n agored i niwed. Mae'n lledaenu'n gyflym ac mae ganddo gyfradd afiachusrwydd uchel, gan effeithio'n nodweddiadol ar dda byw mawr fel moch, defaid a gwartheg, lle gall nifer yr achosion gyrraedd 100%. Mae'r FMDV yn perthyn i'r genwsTraed{0}}a{{1}Mouthviruso'r teulu MicroRNAviridae. Mae'r gronynnau'n sfferig, tua 27-30 nm mewn diamedr, gyda chyfernod gwaddodiad o 146S ar gyfer gronynnau firaol cyfan. Ar hyn o bryd, mae brechlynnau FMD amrywiol ar gael, gan gynnwys brechlynnau firws byw gwanedig, brechlynnau fector firws byw, brechlynnau anweithredol, brechlynnau asid niwclëig, brechlynnau peptid synthetig, a brechlynnau is-uned. Yn gyffredinol, mae brechlynnau FMD anweithredol yn cael llai o sgîl-effeithiau mewn anifeiliaid, ac mae brechlynnau amlfalent yn cynnig gwell effeithiolrwydd imiwneiddio, gan eu gwneud yn brif gynheiliad atal FMD yn Tsieina.

Ultrafiltration Llif Tangential

Ar hyn o bryd, mae uwch-hidlo llif tangential yn ddull puro a chrynhoi a ddefnyddir yn gyffredin wrth gynhyrchu brechlynnau anweithredol amlfalent ar raddfa fawr o glwy'r traed a'r geg. Mae'r dull hwn nid yn unig yn cyflawni'r ffactor crynodiad a ddymunir ond hefyd yn dileu llawer iawn o amhureddau tramor. Defnyddir ultrafiltration llif tangential yn bennaf ar gyfer puro, canolbwyntio, a hidlo (dealting a disodli byffer). Yn ogystal, gellir ei ddefnyddio hefyd ar gyfer egluro cawl eplesu neu gyfrwng diwylliant celloedd gan ddefnyddio microhidlo llif tangential, gan ddisodli allgyrchiad neu eglurhad sylfaenol.

Mewn hidlo fertigol confensiynol, mae moleciwlau mawr yn tueddu i agregu ar wyneb y bilen, gan glocsio'r hidlydd. Fodd bynnag, mae hidlo llif diriaethol yn caniatáu i'r llif fynd yn gyfochrog â'r bilen, gan osgoi'r broblem clogio hon. Yn ystod hidlo llif tangential, gelwir y toddydd a'r sylweddau sy'n llai na maint mandwll y bilen sy'n treiddio trwy'r bilen yn dreiddiad, tra bod sylweddau sy'n fwy na maint y mandwll yn cael eu cadw fel y dwysfwyd. Wedi'i gyfuno â phrosesau golchi a hidlo optimaidd, gellir gwahanu a phuro moleciwlau o wahanol feintiau. Mae'r dechnoleg hon yn cynnig manteision megis cost isel, amodau gweithredu ysgafn, glanhau ac amnewid cyfleus, cyfradd llif treiddiad pilen uchel, a gweithrediad syml, gan ei gwneud yn arbennig o addas ar gyfer crynodiad a phuro sylweddau bioactif ar raddfa fawr.

Defnyddiau a Dulliau

Canlyniadau a Thrafodaeth

O ran puro firws cychwynnol, mae crynodiad uwch-hidlo yn cyflawni cyfradd symud o dros 90% ar gyfer amhureddau fel proteinau nad ydynt yn cynnwys firysau. O ran cyfaint, gall gyflawni crynodiadau uchel o 10-50 gwaith, gan ddarparu cefnogaeth gref ar gyfer puro dilynol. Dewisir colofn ffibr gwag gyda thoriad pwysau moleciwlaidd o 300kd. Gall y maint mandwll hwn, tra'n cadw dros 85% o'r firws, gael gwared ar dros 90% o broteinau amhuredd. Arwynebedd y bilen yw 1600 cm², a'r trwybwn yw 2-5 mL/cm², gan alluogi crynodiad uwch-hidlo i gael ei gwblhau o fewn amser effeithiol (o fewn 2 awr). Dangosir data crynodiad a phuro ultrafiltration manwl yn Nhabl 1.

Tabl 1. Canlyniadau cyfanswm canfod antigenau clwy'r traed a'r genau (mathau O ac A)

Ystyriaethau Dull Puro

Ar hyn o bryd, mae yna wahanol ddulliau puro, ond hyd yn oed gyda'r un dull ar gyfer yr un antigen, mae'r effaith puro yn aml yn anfoddhaol am lawer o resymau, gan gynnwys nodweddu antigen a pharamedrau proses. Er enghraifft, gall newidiadau mewn dylunio moleciwlaidd i fyny'r afon neu systemau diwylliant eplesu newid y strwythur moleciwlaidd firaol, gan arwain at ganlyniadau puro anfoddhaol. Gall dulliau egluro amhriodol gynyddu costau deunydd crai neu faint o brotein heterologaidd, gan gynyddu'r pwysau ar buro i lawr yr afon. Gall crynodiad uwch-hidlo amhriodol, megis gwahanol feintiau mandwll pilen ultrafiltration, ffactorau crynodiad ac elution, cyfraddau llif mewnfa, cyfraddau hidlo, a TMP, arwain at gyfraddau adennill antigen isel. Mae arfer helaeth yn dangos y gall puro gwael achosi adweithiau niweidiol sylweddol mewn anifeiliaid ar ôl imiwneiddio, gan arwain at farwolaeth o bosibl.